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本试剂盒适用于快速提取各种海洋动物组织基因组DNA，采用独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

• 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
  
• 蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过25℃室温保存6个月，4℃保存12个月，-20℃保存2年。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 漂洗液WB第一次使用前请先在中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
  
• 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

• 切取不多于30mg的组织材料，放入装有180μL组织裂解液SL的1.5mL离心管中，涡旋振荡15秒。
  
  • 根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果裂解困难，可先用液氮研磨。
• 加入20μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。将裂解物放置在55℃水浴1～3小时或者直到组织消化完全。
  
  • 不同组织裂解时间不同，通常需0.5～2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2～3次，每次振荡混匀15秒。
    
  • 可选做步骤:如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤2后加20μL RNase A(20mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5～10分钟。
• 加入200μL结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。
  
• 冷却后加100μL异丙醇，充分颠倒或涡旋振荡充分混匀，此时可能出现絮状沉淀。
  
• 将上一步混合物和可能的沉淀都加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。
  
  • 如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。
    
  • 上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
• 加入500μL抑制物去除液IR，12000rpm离心30秒，弃废液。
  
• 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 加入600μL漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB (洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中预热效果更好)，室温放置3～5分钟，12000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。
  
  • 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
• DNA可以存放在2～8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。